随着生物技术的飞速发展，聚合酶链式反应（PCR）技术已成为生物学、医学领域的重要工具，实时荧光PCR技术因其高度的灵敏度和特异性，广泛应用于基因表达分析、病原体检测等领域，本文将围绕实时荧光PCR技术，提供一份全面的试卷，以检验和提高相关人员的专业技能。

（一）选择题

1、实时荧光PCR技术中常用的荧光染料是哪种？

A. SYBR Green I

B. 溴化乙锭

C. 碘化丙啶

D. 尼罗蓝

2、在实时荧光PCR过程中，溶解曲线的作用是什么？

A. 判断PCR产物的特异性

B. 监测PCR反应进程

C. 调整PCR反应条件

D. 提高PCR反应效率

3、实时荧光PCR技术中，内参基因的作用是什么？

A. 增加实验敏感性

B. 提高实验特异性

C. 校正样本间差异

D. 改变PCR反应条件

（二）简答题

1、描述实时荧光PCR技术的原理及主要应用。

2、请简述实时荧光PCR实验中可能出现的常见问题及解决策略。

（三）实验操作题

1、请描述实时荧光PCR实验的基本流程，并指出实验过程中需要注意的关键点。

2、假设你正在进行一项实时荧光PCR实验，但在实验过程中发现溶解曲线出现异常，请分析可能的原因，并提出解决方案。

答案及解析

（一）选择题解析

1、【答案】A

【解析】SYBR Green I是实时荧光PCR中常用的荧光染料，能结合所有双链DNA，产生荧光信号，因此A项正确，溴化乙锭、碘化丙啶和尼罗蓝主要用于核酸染色和观察，不是实时荧光PCR中的常用荧光染料，故排除B、C、D项。

2、【答案】A

【解析】溶解曲线可以反映PCR产物的特异性，通过比较溶解温度（Tm）来判断产物的纯度，因此A项正确，监测PCR反应进程主要通过实时荧光信号的变化来实现，不是溶解曲线的作用，故排除B项，调整PCR反应条件和提高PCR反应效率主要依靠实验人员的经验和技巧，不是溶解曲线的功能，因此排除C、D项。

3、【答案】C

【解析】内参基因在实时荧光PCR技术中的作用是校正样本间的差异，保证实验结果的准确性，因此C项正确，增加实验敏感性、提高实验特异性和改变PCR反应条件不是内参基因的作用，故排除A、B、D项。

（二）简答题解析

1、【答案】实时荧光PCR技术原理：利用特定的引物对目标基因进行扩增，同时加入荧光染料或特异性探针，通过实时监测荧光信号的变化来反映PCR产物的数量，主要应用：基因表达分析、病原体检测、基因突变筛查等。

2、【答案】常见问题包括引物设计不合理、模板浓度不当、反应体系配置错误等，解决策略包括优化引物设计、调整模板浓度、核对反应体系配置等。

（三）实验操作题解析

1、【答案】实时荧光PCR实验基本流程包括：引物设计、模板制备、配制反应体系、设置反应程序、实时监测并分析结果，实验过程中需要注意的关键点包括引物的质量和浓度、模板的完整性和浓度、反应体系的配置准确性以及实时监测和数据分析的精确性。

2、【答案】溶解曲线出现异常可能的原因包括引物设计不合理、模板中存在抑制剂、反应体系配置错误等，解决方案包括重新设计引物、优化模板处理过程、核对并调整反应体系配置等，具体策略应根据异常溶解曲线的具体情况来确定。

本文提供的实时荧光PCR试卷旨在帮助检验和提高相关人员对实时荧光PCR技术的理解和掌握程度，通过这份试卷的解答和解析，相信读者对实时荧光PCR技术会有更深入的了解和认识。